Baza wiedzy o hodowli komórkowej
Czym naprawdę są poszczególne pożywki, bufory i odczynniki — skład, zastosowanie i różnice względem alternatyw. Napisane z myślą o pracy przy stole laboratoryjnym, a nie o broszurze.
Media and formulations
Pożywka chemicznie zdefiniowana
Pożywka chemicznie zdefiniowana to pożywka do hodowli komórkowej, w której znana jest tożsamość i stężenie każdego składnika — bez surowicy, bez hydrolizatów białkowych, bez niescharakteryzowanych ekstraktów. Może nadal zawierać białka, pod warunkiem że są rekombinowane oraz mają znaną sekwencję i stężenie, i właśnie dlatego „chemicznie zdefiniowana” i „bezbiałkowa” to dwie odrębne kategorie, a nie synonimy. Pożywki chemicznie zdefiniowane eliminują zmienność międzyseryjną, ryzyko czynników przypadkowych i obciążenia regulacyjne związane z surowicą, a także stanowią standard w produkcji biofarmaceutycznej w systemach CHO, HEK293 i hybrydom.
→Pożywka RPMI 1640
RPMI 1640 to podstawowa pożywka do hodowli komórkowych, opracowana w Roswell Park Memorial Institute w 1966 roku z myślą o hodowli ludzkich leukocytów w zawiesinie. Zawiera 2,000 mg/L glukozy (11.1 mM) oraz 2,000 mg/L wodorowęglanu sodu (23.8 mM) dobranego do atmosfery 5% CO2, nietypowo dużo fosforanów (około 5.6 mM), mało wapnia (około 0.42 mM) i charakterystyczny zestaw składników obejmujący glutation zredukowany, biotynę, witaminę B12, kwas para-aminobenzoesowy i hydroksyprolinę. Jest standardową pożywką dla limfocytów, hybrydom oraz większości linii krwiotwórczych i limfoidalnych przystosowanych do wzrostu w zawiesinie, zwykle suplementowaną 10% płodowej surowicy bydlęcej.
→MEM alfa (α-MEM) i pożywka minimalna MEM
MEM alfa (α-MEM) to pożywka minimalna Eagle'a wzbogacona o wszystkie aminokwasy endogenne, pirogronian sodu, kwas liponowy, kwas askorbinowy, biotynę i witaminę B12, dostarczana w wersji z rybonukleozydami i deoksyrybonukleozydami albo bez nich. Korzysta z tej samej bazy solnej co MEM — 2,200 mg/L wodorowęglanu sodu dobranego do atmosfery 5% CO2, 1,000 mg/L glukozy i 1.8 mM wapnia — i jest standardową pożywką dla mezenchymalnych komórek zrębu, hodowli szpiku kostnego, osteoblastów, selekcji linii CHO-DXB11 i CHO-DG44 oraz wielu typów komórek pierwotnych. Wersja bez nukleozydów jest konieczna w układach selekcyjnych opartych na HAT i na metotreksacie.
→