단클론 항체 생산용 세포 배양 배지
CHO 유가식 운전 14일째에 유용한 배지는 카탈로그 문구가 아니라 측정된 산출물로 판단됩니다: 3.2-5.8 g/L IgG, 82%를 초과하는 수확 생존율, 그리고 생산 피크 이후 2.8 g/L 미만으로 유지되는 젖산입니다. 이 응용 페이지는 CHO-K1 (ATCC CCL-61), CHO-DG44, CHO-S 및 하이브리도마 융합 세포주를 사용한 종균 확대 단계, 접종 및 12-16일 유가식 생산 전반의 단클론 항체 생산용 세포 배양 배지를 다룹니다.
공정 맥락 — 바이오공정에서 적용되는 위치
단클론 항체 생산 배지는 동일 공정에서 두 가지 다른 역할을 지원해야 합니다: 종균 확대 단계를 통한 빠른 증식, 그리고 생산 배양에서의 제어된 대사입니다.
CHO-K1 (ATCC CCL-61), CHO-DG44 및 CHO-S 현탁 공정의 경우, 당사의 일반적인 권장 사항은 화학적으로 정의된 동물 유래 성분 무함유 기본 배지와 3일부터 12일까지 사용하는 농축 피드를 함께 적용하는 것입니다. 기본 배지는 pH 7.21, 규격 7.00-7.40, 삼투질농도 312 mOsmol/kg, 규격 260-320 mOsmol/kg, LAL 기준 엔도톡신 ≤0.25 EU/mL, qPCR 기준 마이코플라스마 불검출, USP <71> 무균성 적합으로 출하됩니다.
하이브리도마 융합 세포주는 다르게 취급됩니다. 이들은 무혈청 전환을 더 느리게 견디는 경우가 많으므로, 일반적으로 하이브리도마 무혈청 배지에 2-4 mM L-글루타민 등가물을 더해 시작한 뒤 두 번의 계대에 걸쳐 혈청 이월을 줄입니다.
유가식 거동은 아미노산 및 포도당 공급에 의해 크게 좌우됩니다. CHO 공정에서 380 mOsmol/kg를 초과하는 과도한 삼투질농도는 일부 클론에서 qP를 높일 수 있지만 통합 생존 세포 밀도를 감소시킬 수 있으므로, 배지 선택은 최고 생존 세포 밀도뿐 아니라 클론 대사와 연결되어야 합니다 [1] 장 X 등. 생명공학 및 생물공학 2015;112(7):1418-1429. doi:10.1002/bit.25554.
단클론 항체 생산 배지가 수행해야 하는 역할(pH, 삼투질농도, 포도당, 글루타민, 젖산 내성)
배지는 성장 단계가 느려진 후에도 배양의 생산성을 유지해야 합니다.
| 매개변수 | 작업 목표 | 중요한 이유 |
|---|---|---|
| 출하 시 pH | 7.20-7.30, 일반 로트 7.21 | 접종 충격을 줄이고 CO2로 제어되는 생산 pH 6.95-7.15를 지원합니다 |
| 삼투질농도 | 기본 배지 290-330 mOsmol/kg, 피드 후 <380 mOsmol/kg | 농축 영양분 전달을 가능하게 하면서 생존율을 보호합니다 |
| 포도당 전략 | 접종 시 4.0-6.0 g/L, 유가식 중 1.0-4.0 g/L | 영양 고갈을 제한하고 높은 젖산 축적을 피합니다 |
| 글루타민 등가물 | 공정에 따라 2-6 mM | 암모니아가 4 mM를 초과하도록 유도하지 않으면서 성장을 지원합니다 |
| 젖산 내성 | 8일 이후 <3.0 g/L 유지 | 후기 단계 생존율과 수확액 투명도를 개선합니다 |
출하 시험의 경우, 표준 CHO 무혈청 생산 로트에는 CHO-K1 (ATCC CCL-61)에서의 성장 촉진이 포함됩니다: 96 h에서 생존율 95.8%, 2.7 × 10^6 cells/mL, 진탕 플라스크 선별에서 배가 시간 22.4 h. 병행 HEK293T (ATCC CRL-3216) 허용 세포 확인은 선택된 보충제 로트에 사용되며, 96 h에서 생존율 96.3%입니다.
발표된 유가식 연구에서는 포도당 및 아미노산 피드 시점이 클론 변경 없이 항체 역가를 30% 이상 변화시킬 수 있음을 보여줍니다 [2] 리 F 등. 생명공학 진전 2012;28(3):682-690. doi:10.1002/btpr.1533.
역가/생존율 기준 당사 권장 세트 순위
새 CHO 단클론 항체 프로그램의 경우 먼저 고생존율 옵션으로 시작한 다음, 클론이 이미 강한 생존 세포 밀도에 도달한다면 더 높은 qP 피드를 선별하세요.
| 순위 | 권장 배지 세트 | 가장 적합한 경우 | 일반적인 14일 결과 |
|---|---|---|---|
| 1 | CCM CHO-CD 유가식 기본 배지 + CHO 피드 A/B | CHO-K1 (ATCC CCL-61), CHO-DG44, CHO-S | 4.6-5.8 g/L 역가, 84-91% 수확 생존율, 최고 VCD 15-22 × 10^6 cells/mL, qP 28-41 pg/cell/day |
| 2 | CCM CHO ADCF 고밀도 배지 + 농축 피드 | 고밀도 현탁 종균 확대 단계 및 생산 | 3.8-5.2 g/L 역가, 82-88% 수확 생존율, 최고 VCD 18-26 × 10^6 cells/mL, qP 20-34 pg/cell/day |
| 3 | CCM CHO 무혈청 전환 배지 | 혈청 감소 프로젝트 및 초기 클론 적응 | 2.1-3.6 g/L 역가, 78-86% 수확 생존율, 최고 VCD 8-14 × 10^6 cells/mL, qP 18-29 pg/cell/day |
| 4 | CCM 하이브리도마 무혈청 배지 + 보충제 팩 | 하이브리도마 융합 세포주 및 항체 선별 배양 | 80-450 mg/L 항체, 수확 시 80-90% 생존율, 6회 계대 동안 계대 안정성 |
순위는 먼저 유가식 생산성을 기준으로 하고, 그다음 수확 생존율을 기준으로 합니다. 다운스트림 팀이 숙주 세포 단백질, DNA 부담 또는 필터 부하에 민감하다면, 가장 높은 역가 조건이 최저 비용 조건은 아닐 수 있습니다.
당사의 파일럿 선별에서 CHO-K1 (ATCC CCL-61) IgG1 모델은 1순위 세트에서 5.4 g/L에 도달했으며, 14일째 생존율은 88.6%, 최고 VCD는 19.7 × 10^6 cells/mL였습니다. 동일 클론은 전환 배지에서 3.0 g/L에 도달했지만, 혈청 함유 저장 배양물에서 더 쉽게 적응했습니다.
측정 수치를 포함한 사례 연구
2 L 교반 탱크 연구는 CHO-K1 (ATCC CCL-61) IgG1 생산 세포를 사용하여 수행되었으며, CCM CHO-CD 유가식 기본 배지에 0.45 × 10^6 cells/mL로 접종했습니다. 배양은 37 °C 성장 단계, 5일째 33 °C로 온도 전환, 용존 산소 40%, 그리고 3, 5, 7, 9, 11일째 피드 추가를 사용했습니다.
| 일자 | VCD | 생존율 | 포도당 | 젖산 | IgG 역가 |
|---|---|---|---|---|---|
| 3 | 3.8 × 10^6 cells/mL | 97.2% | 2.4 g/L | 1.1 g/L | 0.18 g/L |
| 7 | 14.9 × 10^6 cells/mL | 95.1% | 1.8 g/L | 2.6 g/L | 1.92 g/L |
| 10 | 20.6 × 10^6 cells/mL | 91.4% | 2.1 g/L | 2.2 g/L | 3.84 g/L |
| 14 | 12.2 × 10^6 cells/mL | 88.6% | 1.5 g/L | 1.7 g/L | 5.42 g/L |
7일부터 14일까지 계산된 qP는 36 pg/cell/day였습니다. 수확 시 삼투질농도는 356 mOsmol/kg였고, 정화 전 최종 pH는 7.04였습니다.
이는 구매 적격성 평가에 대해 당사가 선호하는 프로필입니다: 포도당 급락 없음, 운전 중반 이후 젖산 소비, 수확 시 85% 초과 생존율. 유사한 젖산 전환 거동은 CHO 단클론 항체 배양에서 개선된 유가식 생산성과 관련이 있는 것으로 보고되었습니다 [3] 바르하이트 J 등. 생명공학 학술지 2014;172:82-94. doi:10.1016/j.jbiotec.2013.12.008.
구매 참고사항
초기 선별용으로는 기본 배지 500 mL 또는 1 L 병과 그에 맞는 급이 농축액을 요청하십시오. 공정 확인용으로는 대부분의 구매자가 로트별 분석성적서가 포함된 10 L, 20 L 또는 50 L 포장으로 전환합니다.
- 권장 시작 주문: 2 × 1 L CCM CHO-CD 유가식 기본 배지, 1 × 250 mL CHO 급이 A, 1 × 250 mL CHO 급이 B, 1 × 100 mL 생산성 보충제.
- 출하 문서 묶음: pH, 삼투질농도, 엔도톡신, 무균성, 마이코플라스마 정량 중합효소연쇄반응, 외관, 성장 촉진.
- 작은 배지: 전 세계 무료 배송
- 저온 유통 권장 사항: 액상 기본 배지는 2-8 °C, 차광 보관, 동결 금지.
귀하의 캠페인에서 기본 배지를 100 L 초과 사용하거나 클론 선별이 아직 진행 중인 경우 로트 예약을 요청하십시오. 포장 크기와 제조 일정에 따라 60-120일 동안 서로 맞춘 기본 배지 및 급이 로트를 예약할 수 있습니다.
일반적인 납기는 재고가 있는 연구용 포장의 경우 영업일 기준 3-7일, 구성형 대량 포장의 경우 2-5주입니다. 충전 전에 요청하는 경우, 대량 출하에는 CHO-K1 (ATCC CCL-61)에서의 추가 14일 세포 성장 촉진 판독 결과를 포함할 수 있습니다.
참고문헌
[1] 장 X 등. 생명공학 및 생물공학 2015;112(7):1418-1429. 디지털 객체 식별자:10.1002/bit.25554.
[2] 리 F 등. 생명공학 진전 2012;28(3):682-690. 디지털 객체 식별자:10.1002/btpr.1533.
[3] 바르하이트 J 등. 생명공학 저널 2014;172:82-94. 디지털 객체 식별자:10.1016/j.jbiotec.2013.12.008.
[4] 김 JY 등. 단일클론 항체 2012;4(4):466-479. 디지털 객체 식별자:10.4161/mabs.20432.
