세포 배양 시약
pH 7.21 및 296 mOsmol/kg인 DPBS 출하 승인 로트는 광범위한 완충액 설명보다 더 많은 정보를 제공합니다. 이 카탈로그는 완충/세척, 해리, 증식 및 동결 단계 전반에서 사용되는 98개의 세포 배양 시약을 다룹니다. 구매자는 보통 PBS 또는 HBSS로 시작한 다음 Trypsin-EDTA, Penicillin-Streptomycin, L-Glutamine, ITS 또는 B-27 보충제, 그리고 이에 맞는 동결 배지를 추가합니다. 각 로트는 배송 전에 출하 승인 규격에 따라 검사됩니다.
세포 배양 시약: 이 카탈로그의 구성과 선택 방법
카탈로그 범위: PBS / DPBS, HBSS, HEPES 완충액, Trypsin-EDTA, Penicillin-Streptomycin, L-Glutamine, ITS 보충제, B-27 보충제, 세포 동결 배지, 그리고 Collagenase, Dispase, Accutase를 포함한 해리 효소 전반의 98개 시약입니다.
가장 일반적인 작업흐름은 완충/세척 → 해리 → 증식 → 동결입니다. HeLa (ATCC CCL-2), Vero (ATCC CCL-81), MDCK (ATCC CCL-34), NIH 3T3 (ATCC CRL-1658) 같은 부착 세포주의 경우 시약 선택은 탈착 시간, 막 회복 및 계대 후 생존율에 영향을 줍니다. HEK293T (ATCC CRL-3216)의 경우 세척 및 형질주입 준비 중 삼투질농도 변동이 사용자가 예상하는 것보다 더 중요한 경우가 많습니다.
세포 유형, 혈청 조건 및 하류 분석부터 시작하십시오.
일상적인 포유류 배양의 경우 Trypsin-EDTA 전 세척용으로 칼슘 및 마그네슘이 없는 DPBS를 선택하십시오. 상피 세포 또는 전단에 더 민감한 단층의 경우 효소 강도와 접촉 시간을 제어 변수로 사용하십시오. 저혈청 증식의 경우 L-Glutamine 또는 안정형 글루타민 공급원 계획을 ITS 또는 B-27 유형 보충과 조합하십시오. 글루타민 분해와 암모니아 형성이 며칠에 걸쳐 성장 성능을 변화시킬 수 있기 때문입니다 [1] Ozturk SS, Palsson BO. Biotechnol Prog 1990;6(2):121-128. doi:10.1021/bp00002a005.
의사결정 트리
1. 해리 전에 세포를 세척하고 있습니까?
- Trypsin-EDTA 작업흐름에는 칼슘과 마그네슘이 없는 DPBS를 사용하십시오.
- 완전 배지 밖에서 짧게 취급할 때 균형 염과 포도당 지원이 필요하면 HBSS를 사용하십시오.
- 플레이트가 5% CO₂ 조건 밖에 10분 넘게 머무는 경우 HEPES 완충액을 사용하십시오.
2. 세포가 부착형입니까, 부유형입니까?
- 부착형: 세포외기질 강도에 따라 Trypsin-EDTA, Accutase, Dispase 또는 Collagenase를 선택하십시오.
- 부유형: 증식 보충제, 타당한 경우 항생제, 동결 배지를 우선시하십시오.
- 일차 배양 또는 기질이 풍부한 배양: Collagenase를 0.5-2.0 mg/mL에서 시험하고 cm²당 생존 수율을 기록하십시오.
3. 최종 분석이 항생제 또는 잔류 효소에 민감합니까?
- HEK293T (ATCC CRL-3216) 형질주입의 경우 최적화 중 일상적인 항생제 이월을 피하십시오.
- HepG2 (ATCC HB-8065)의 대사 분석에서는 글루타민 사용 기간과 포도당 배경을 추적하십시오.
- U-2 OS (ATCC HTB-96)의 이미징에서는 형광 배경이 중요할 경우 잔류 phenol red와 효소를 철저히 헹구십시오.
간단한 답: 재현 가능한 시간 범위 안에서 필요한 세포 수율을 제공하는 가장 순한 시약을 선택하십시오.
제품 간 사양 비교
| 시약 계열 | 일반적인 출하 승인 검사 | 현재 로트 값 예시 | 일반적인 선택 참고사항 |
|---|---|---|---|
| PBS / DPBS | pH 7.0-7.4, 삼투질농도 260-320 mOsmol/kg, 무균성 | pH 7.21, 296 mOsmol/kg, USP <71> 통과 | trypsin 처리 전에는 칼슘과 마그네슘이 없는 것을 선택하십시오. |
| HBSS | pH 7.1-7.5, 삼투질농도 270-330 mOsmol/kg, 엔도톡신 | pH 7.32, 305 mOsmol/kg, LAL 기준 엔도톡신 ≤0.25 EU/mL | 포도당 함유 염이 선호되는 짧은 세척에 유용합니다. |
| HEPES 완충액 | HEPES 농도 1.0 M 또는 25 mM 형식, pH 7.20-7.50 | 20-25°C에서 pH 7.38, 생물부하 미검출 | CO₂ 배양기 밖 벤치 취급 중 pH 제어를 개선합니다. |
| Trypsin-EDTA | Trypsin 활성, EDTA 농도, 무균성, 마이코플라스마 qPCR | 0.25% trypsin, 0.53 mM EDTA, 마이코플라스마 미검출 | 시간을 정한 노출을 사용하며, 많은 불멸화 단층 세포에서는 보통 2-6분입니다. |
| Penicillin-Streptomycin | 역가, 투명도, 무균성 | 10,000 U/mL penicillin, 10,000 µg/mL streptomycin, USP <71> 통과 | 위험 관리 시약으로 적합하지만, 무균 조작 기술을 대체하지는 않습니다. |
| L-Glutamine | 농도, pH, 삼투질농도, 외관 | 200 mM, pH 6.1, 투명 용액 | 글루타민은 따뜻한 보관 중 분해되므로 분주량을 계획하십시오 [1] Ozturk SS, Palsson BO. Biotechnol Prog 1990;6(2):121-128. doi:10.1021/bp00002a005. |
| 세포 동결 배지 | DMSO 농도, 무균성, 회복 시험 | 10% DMSO 형식, HEK293T (ATCC CRL-3216) 해동 후 24 h 생존율 91.8% | 냉각 속도, 바이알 밀도, 무혈청 또는 혈청 함유 선호도에 맞추십시오. |
사용량이 많은 시약의 경우 구매 주문 승인 전에 pH, 삼투질농도, 엔도톡신, 무균성 및 마이코플라스마 항목이 포함된 현재 분석증명서를 요청하십시오.
일반적인 문제점
해리 전에 잘못된 염 형식을 사용하는 경우. 칼슘과 마그네슘은 일부 단층 세포에서 Trypsin-EDTA 방출을 늦출 수 있습니다. 완충액 변경 후 HeLa (ATCC CCL-2) 탈착 시간이 3분에서 8분으로 늘어나면 세척 완충액에 2가 양이온이 포함되어 있는지 확인하십시오.
효소를 세포 위에 너무 오래 두는 경우. 과노출은 막 단백질 회복을 줄이고 계대 후 부착 효율을 낮출 수 있습니다. Vero (ATCC CCL-81)의 경우 실무적인 공정 범위는 흔히 37°C에서 육안 확인과 함께 3-5분이며, 이후 즉시 중화합니다.
항생제를 영구적인 해결책으로 취급하는 경우. Penicillin-Streptomycin은 조작 기술 문제가 해결되지 않은 상태에서도 눈에 보이는 세균 성장을 억제할 수 있습니다. 세포은행 및 분석에 중요한 증식의 경우 최종 판독 전 무항생제 계대를 사용하고 출하 승인 계획에 마이코플라스마 qPCR을 포함하십시오.
혈청 및 보충제 변동성을 무시하는 경우. 혈청 및 보충제 선택은 증식, 분화 상태 및 스트레스 반응에 영향을 줍니다. 혈청 대체 논의는 종종 윤리와 공급에 초점을 맞추지만, 분석적 핵심은 더 단순합니다. 보충제를 변경하기 전에 측정 가능한 종말점을 정의하십시오 [2] van der Valk J et al. ALTEX 2018;35(1):99-118. doi:10.14573/altex.1705101.
제품 카드
PBS / DPBS: 칼슘 및 마그네슘 무함유 또는 완전 염 형식의 일상 세척 완충액입니다. 일반적인 출하 승인 범위: pH 7.0-7.4 및 260-320 mOsmol/kg.
HBSS: 짧은 취급 단계, 실간 운반 및 포도당 함유 염이 유용한 세척 조건을 위한 균형 염 용액입니다.
HEPES 완충액: 벤치 절차, 현미경 설정 및 제어된 CO₂ 밖에서의 플레이트 취급을 위한 pH 안정화입니다.
Trypsin-EDTA: 0.05% 또는 0.25% trypsin 형식의 부착 세포 해리용입니다. 세포 부착 강도와 허용 가능한 표면 표지자 영향에 따라 선택하십시오.
Penicillin-Streptomycin: 일반적인 100× 항생제 원액으로, 보통 10,000 U/mL penicillin 및 10,000 µg/mL streptomycin입니다.
L-Glutamine: 배지 보충용 200 mM 원액입니다. 소량으로 분주하고 반복 가온을 피하십시오.
ITS 보충제: 저혈청 성장 연구를 위한 insulin, transferrin 및 selenium 지원입니다.
B-27 보충제: 정의된 보충이 필요한 신경세포 및 특수 배양 지원입니다.
세포 동결 배지: 흔히 10% DMSO 및 제어 속도 냉각을 사용하는 혈청 함유 및 무혈청 동결보존 형식입니다.
Collagenase / Dispase / Accutase: 일차 조직, 상피 시트, 오가노이드 취급 및 더 부드러운 계대 필요성을 위한 효소 선택지입니다.
주문 요약: 입고 품질관리에 필요한 시약 계열, 포장 크기, 멸균 여과 요구사항 및 분석증명서 항목을 선택하십시오. 반복 주문 실험실의 경우 PBS, Trypsin-EDTA, L-Glutamine 및 동결 배지를 혼합한 상자 단위 견적을 제공할 수 있습니다.
무료 전 세계 배송관련 가이드
- PBS와 DPBS 중 선택하는 방법: 염 조성, 칼슘과 마그네슘, 해리 영향.
- Trypsin-EDTA 시간 지침: HEK293T (ATCC CRL-3216), CHO-K1 (ATCC CCL-61), Vero (ATCC CCL-81), MDCK (ATCC CCL-34)에 대한 실무적 탈착 시간 범위.
- 따뜻한 작업실에서의 글루타민 취급: 200 mM 원액을 분주하고 반복적인 온도 순환으로부터 보호해야 하는 이유.
- 동결 배지 비교: DMSO 백분율, 해동 후 생존율, 24 h 회복 및 첫 계대 형태.
상류 공정 개발팀의 경우 시약 관리는 공정 관리의 일부가 됩니다. 특히 플라스크에서 제어된 생물반응기 시스템으로 이동할 때 포유류 배양 성능은 영양소 안정성, 오염 관리 및 취급 재현성에 민감합니다 [3] Butler M, Meneses-Acosta A. Appl Microbiol Biotechnol 2012;96(4):885-894. doi:10.1007/s00253-012-4451-z.
