Solución Trypsin-EDTA al 0.25%
La solución Trypsin-EDTA al 0.25% es un reactivo líquido de disociación celular filtrado estérilmente que contiene trypsin y EDTA para desprender células adherentes en cultivo. Suministrado como líquido congelado de 500 mL, CCM-RG-0043 está formulado con 2.5 g/L trypsin y 0.38 g/L EDTA·4Na para subcultivo rutinario, soporte de escalado y flujos de trabajo de I+D. Este reactivo de origen animal se envía en hielo seco, con envío mundial gratuito disponible para pedidos cualificados a través de CellCultureMedia.
- ✓ Envío mundial gratuito
- ✓ Fabricación alineada con ISO
- ✓ Certificado de análisis previa solicitud
- ✓ Cotización de volúmenes a granel y personalizados previa solicitud
Descripción general
CCM-RG-0043 es una solución Trypsin-EDTA al 0.25% diseñada para la disociación controlada de monocapas de células mamíferas adherentes de recipientes de cultivo, microportadores y superficies de crecimiento relacionadas. La formulación combina 2.5 g/L trypsin, una enzima proteolítica utilizada para escindir proteínas asociadas a la adhesión, con 0.38 g/L EDTA·4Na, un agente quelante que ayuda a reducir la fijación celular dependiente de calcio y magnesio. Esta composición de doble acción favorece un desprendimiento consistente cuando los usuarios necesitan un reactivo de digestión estándar de origen animal para operaciones de cultivo celular.
El producto se suministra como líquido filtrado estérilmente en un formato de 500 mL para uso en laboratorio y desarrollo de procesos. Las especificaciones clave de liberación incluyen pH 7.2–8.0 y osmolalidad 270–320 mOsmol/kg, lo que respalda la compatibilidad con flujos de trabajo comunes de cultivo de células mamíferas cuando se utiliza de acuerdo con un protocolo establecido. El reactivo se clasifica dentro de los reactivos de digestión y disociación celular en nuestro portafolio de reactivos para cultivo celular, por lo que es adecuado para equipos de compras que estandarizan consumibles adyacentes a medios en laboratorios de I+D, piloto y apoyo a la producción.
Aplicaciones
- Subcultivo rutinario de cultivos de células adherentes donde se requiere desprendimiento enzimático antes de la resiembra, el recuento, la criopreservación o la preparación de ensayos.
- Estudios de desarrollo de procesos que evalúan el momento de cosecha, la duración de exposición, la estrategia de neutralización y la recuperación celular posterior a la disociación en formatos de recipiente definidos.
- Flujos de trabajo de escalado que implican frascos, recipientes de cultivo multicapa, botellas roller o sistemas de cultivo basados en microportadores, sujetos a cualificación por parte del usuario para el tipo celular objetivo.
- Protocolos de I+D que requieren disociación asistida por EDTA para mejorar la eficiencia de desprendimiento en comparación con enfoques solo enzimáticos en sistemas de fijación sensibles al calcio y al magnesio.
- Preparación de suspensiones unicelulares para ensayos in vitro posteriores, flujos de trabajo de transfección, actividades de bancos celulares o muestreo analítico donde se especifica un reactivo de desprendimiento estandarizado.
Debido a que la sensibilidad a trypsin varía según la línea celular, la edad del cultivo, la confluencia, el recubrimiento de la matriz y las condiciones con o sin suero, los usuarios deben validar el tiempo de exposición y el método de neutralización antes de la implementación rutinaria. Para cultivos de alto valor o sensibles al cizallamiento, se recomienda una prueba de cualificación a pequeña escala para definir el desempeño de desprendimiento, la morfología, la viabilidad y el comportamiento de resiembra en condiciones específicas del sitio. Los responsables de compras pueden hacer referencia a CCM-RG-0043 al solicitar lotes recurrentes, mientras que los equipos técnicos pueden alinear la inspección entrante con los requisitos de pH, osmolalidad, esterilidad, almacenamiento y vida útil.
Almacenamiento y manipulación
Almacene CCM-RG-0043 congelado a -30 to -5 °C y protegido de la luz. La vida útil indicada es de 24 meses cuando el producto permanece sin abrir y se almacena en las condiciones recomendadas. El producto se envía en hielo seco para mantener el estado congelado durante el tránsito; al recibirlo, inspeccione el recipiente, verifique el etiquetado y transfiéralo rápidamente a almacenamiento congelado cualificado. Evite ciclos repetidos de congelación-descongelación porque el desempeño enzimático puede disminuir tras estrés térmico innecesario. Para uso rutinario, descongele solo el volumen requerido en condiciones controladas, mezcle suavemente después de descongelar y utilice técnica aséptica para reducir el riesgo de contaminación. No caliente durante períodos prolongados y devuelva las alícuotas no utilizadas al almacenamiento adecuado solo si su procedimiento interno permite recongelar. Al igual que con otros reactivos de disociación enzimática, los usuarios deben confirmar que la temperatura, el tiempo de contacto y las condiciones de inactivación sean compatibles con el sistema de cultivo específico. Para la planificación de suministro en múltiples sitios o requisitos de lotes más grandes, envíe los detalles mediante solicitar una cotización para que nuestro equipo pueda coordinar la disponibilidad, el cronograma de envío y las necesidades de documentación.
Calidad y documentación
CCM-RG-0043 se produce como un reactivo líquido de origen animal, filtrado estérilmente, para aplicaciones relacionadas con el cultivo celular. La información de liberación incluye rango de pH, rango de osmolalidad, forma, método de esterilidad, condición de almacenamiento, condición de envío y vida útil, lo que respalda la revisión técnica por parte de equipos de calidad, compras y desarrollo de procesos. Hay un Certificado de Análisis disponible previa solicitud para documentación específica del lote, y los clientes pueden utilizar nuestra información de calidad para apoyar la cualificación de proveedores, la revisión de material entrante y los archivos internos de control de cambios. Las prácticas de fabricación y documentación están alineadas con expectativas de calidad de tipo ISO para cadenas de suministro de investigación y bioprocesamiento, con atención a la trazabilidad, el control de especificaciones y un embalaje consistente.
CellCultureMedia admite pedidos B2B internacionales para laboratorios académicos, biotecnológicos y biofarmacéuticos. Esta unidad de 500 mL tiene un precio de $201.39, y el envío mundial gratuito está disponible cuando las condiciones del pedido y la logística del destino lo permiten. Se utiliza envío en hielo seco para el control de temperatura, y el plazo de entrega puede depender del estado del inventario, la ruta de exportación y la disponibilidad del servicio de cadena de frío. Para demanda recurrente, los usuarios pueden solicitar precios por volumen, suministro programado o inventario reservado para reducir la variabilidad de abastecimiento en campañas de subcultivo, bancos celulares y desarrollo.
Aspectos destacados de la formulación
Contiene (+)
2.5 g/L trypsin, 0.38 g/L EDTA·4Na
Especificaciones
| Forma | Líquido |
|---|---|
| Clasificación | Origen animal |
| Esterilidad | Esterilizado por filtración |
| Vida útil | 24 meses |
| Osmolalidad | 270–320 mOsmol/kg |
| Nivel de pH | 7.2–8.0 |
| Condiciones de almacenamiento | -30~-5 ℃, protegido de la luz |
| Condiciones de envío | Dry ice |
| Área de aplicación | Reactivos relacionados con el cultivo celular |
| Categoría de producto | Reactivos de disociación y digestión celular |
Acerca de este producto
¿Qué líneas celulares admite este producto?
¿Cómo se envía este producto?
¿Está disponible un Certificado de Análisis?
¿Cuál es el plazo de entrega habitual?
¿Ofrecen precios a granel?
Más información sobre esto
- Recuento de células con hemocitómetroUn hemocitómetro es un portaobjetos de vidrio grueso con una cuadrícula grabada con precisión sobre la que un cubreobjetos crea una cámara de exactamente 0,1 mm de profundidad, de modo que un volumen conocido de suspensión celular puede contarse al microscopio y convertirse en una concentración. Para células de mamífero se cuentan los cuatro cuadros de las esquinas de 1 mm2, se calcula la media, se multiplica por el factor de dilución y se multiplica por 10^4 para obtener células por mL, porque cada cuadro de esquina encierra exactamente 10^-4 mL. Mezclar la muestra 1:1 con azul de tripano al 0,4% antes de cargar la cámara permite obtener el porcentaje de viabilidad a partir del mismo recuento, ya que solo las células muertas, con la membrana comprometida, captan el colorante.
- Trypsin-EDTAEl Trypsin-EDTA es un reactivo de disociación celular que combina la tripsina, una serina proteasa que corta enlaces peptídicos por el lado C-terminal de los residuos de lisina y arginina en las proteínas de superficie y de la matriz, con el quelante EDTA, que fija los iones calcio y magnesio que necesitan las moléculas de adhesión celular. Se suministra en una solución salina equilibrada sin calcio ni magnesio, lo más habitual al 0.05% de tripsina (0.5 g/L) para líneas celulares de rutina y al 0.25% (2.5 g/L) para células firmemente adheridas y cultivos primarios. El uso típico son 2-5 minutos a 37 °C, seguidos de inmediato por la neutralización con medio con suero o con un inhibidor de tripsina definido.
- Subcultivo celular (pase)El subcultivo celular, también llamado pase, es el traspaso de las células de un cultivo que se aproxima a la confluencia a recipientes nuevos con medio fresco para que el crecimiento pueda continuar. Las células adherentes se despegan primero, normalmente con Trypsin-EDTA al 0.25% o al 0.05% o con un reactivo de disociación no enzimático, y se vuelven a sembrar a una densidad menor fijada por una proporción de división como 1:4; las células en suspensión simplemente se diluyen en medio fresco sin ningún paso de disociación. La mayoría de las líneas celulares adherentes continuas se subcultivan al 70-80% de confluencia, lo que suele significar dos o tres pases por semana.
- Tripsina frente a Accutase: cómo elegir un reactivo de disociación celularLa tripsina es una serina proteasa pancreática que corta los enlaces peptídicos después de lisina y arginina; despega las células deprisa, pero sin discriminar: hay que detenerla con suero o con un inhibidor de tripsina, y corta las proteínas de superficie junto con los contactos de adhesión. Accutase es una mezcla propietaria de enzimas proteolíticas y colagenolíticas de origen invertebrado, suministrada en DPBS sin calcio ni magnesio con 0.5 mM de EDTA; actúa de forma más lenta y suave, no requiere paso de neutralización y conserva más epítopos de superficie. Elija tripsina para el subcultivo rutinario de líneas adherentes robustas, cuando importa la velocidad y las células vuelven directamente al cultivo; elija Accutase cuando las células recogidas son el experimento: citometría de flujo sobre marcadores de superficie, células madre pluripotentes, neuronas primarias o cualquier suspensión de células individuales en la que la viabilidad y el fenotipo deban sobrevivir a la recogida.
- DispasaLa dispasa, comercializada también como dispasa II o proteasa neutra, es una metaloproteasa dependiente de zinc de Paenibacillus (antes Bacillus) polymyxa, EC 3.4.24.4, que se emplea para la disociación suave de tejidos y para desprender células y láminas epiteliales intactas. Corta la fibronectina y el colágeno de tipo IV, degrada solo mínimamente el colágeno de tipo I y no corta la laminina ni el colágeno de tipo V, y por eso permite separar una epidermis de la dermis o levantar una lámina epitelial confluente del plástico sin destruir las uniones intercelulares. Como es una metaloproteasa que necesita zinc para la catálisis y calcio para su estabilidad, la inhiben el EDTA, el EGTA y la 1,10-fenantrolina, y debe diluirse en un tampón con calcio y nunca en uno basado en quelantes.
