0.25% Trypsin-EDTA-Lösung
0.25% Trypsin-EDTA-Lösung ist ein sterilfiltriertes flüssiges Zelldissoziationsreagenz, das trypsin und EDTA zum Ablösen adhärenter Zellen in Kultur enthält. CCM-RG-0043 wird als 500 mL gefrorene Flüssigkeit geliefert und ist mit 2.5 g/L trypsin und 0.38 g/L EDTA·4Na für routinemäßige Passagierung, Scale-up-Unterstützung und R&D-Workflows formuliert. Dieses Reagenz tierischen Ursprungs wird auf Trockeneis versendet; kostenloser weltweiter Versand ist für qualifizierte Bestellungen über CellCultureMedia verfügbar.
- ✓ Kostenloser weltweiter Versand
- ✓ ISO-orientierte Herstellung
- ✓ Analysenzertifikat auf Anfrage
- ✓ Angebote für Großmengen und kundenspezifische Volumina auf Anfrage
Übersicht
CCM-RG-0043 ist eine 0.25% Trypsin-EDTA-Lösung, die für die kontrollierte Dissoziation adhärenter Monolayer von Säugetierzellen aus Kulturgefäßen, Microcarriern und verwandten Wachstumsoberflächen entwickelt wurde. Die Formulierung kombiniert 2.5 g/L trypsin, ein proteolytisches Enzym zur Spaltung adhäsionsassoziierter Proteine, mit 0.38 g/L EDTA·4Na, einem Chelatbildner, der dazu beiträgt, calcium- und magnesiumabhängige Zellanhaftung zu reduzieren. Diese dual wirksame Zusammensetzung unterstützt eine konsistente Ablösung, wenn Anwender ein standardmäßiges Verdauungsreagenz tierischen Ursprungs für Zellkulturoperationen benötigen.
Das Produkt wird als sterilfiltrierte Flüssigkeit im 500 mL Format für den Labor- und Prozessentwicklungsgebrauch geliefert. Wichtige Freigabespezifikationen umfassen pH 7.2–8.0 und Osmolalität 270–320 mOsmol/kg und unterstützen bei Verwendung gemäß einem etablierten Protokoll die Kompatibilität mit gängigen Workflows der Säugetierzellkultur. Das Reagenz ist innerhalb unseres Portfolios an Zellkulturreagenzien den Zellverdauungs- und Dissoziationsreagenzien zugeordnet und eignet sich damit für Einkaufsteams, die mediennahe Verbrauchsmaterialien über R&D-, Pilot- und produktionsunterstützende Labore hinweg standardisieren.
Anwendungen
- Routinemäßige Passagierung adhärenter Zellkulturen, bei denen eine enzymatische Ablösung vor Wiederaussaat, Zählung, Kryokonservierung oder Assay-Setup erforderlich ist.
- Prozessentwicklungsstudien zur Bewertung von Erntezeitpunkt, Expositionsdauer, Neutralisierungsstrategie und Zellrückgewinnung nach der Dissoziation über definierte Gefäßformate hinweg.
- Scale-up-Workflows mit Flaschen, Mehrschicht-Kulturgefäßen, Rollerflaschen oder Microcarrier-basierten Kultursystemen, vorbehaltlich der Anwenderqualifizierung für den Zielzelltyp.
- R&D-Protokolle, die eine EDTA-unterstützte Dissoziation erfordern, um die Ablösungseffizienz im Vergleich zu ausschließlich enzymatischen Ansätzen in calcium- und magnesiumsensitiven Anhaftungssystemen zu verbessern.
- Herstellung von Einzelzellsuspensionen für nachgelagerte in vitro-Assays, Transfektions-Workflows, Zellbanking-Aktivitäten oder analytische Probenahmen, bei denen ein standardisiertes Ablösereagenz spezifiziert ist.
Da die trypsin-Empfindlichkeit je nach Zelllinie, Kultur alter, Konfluenz, Matrixbeschichtung sowie serumfreien oder serumhaltigen Bedingungen variiert, sollten Anwender Expositionszeit und Neutralisierungsmethode vor der routinemäßigen Implementierung validieren. Für hochwertige oder scherempfindliche Kulturen wird ein kleinmaßstäblicher Qualifizierungslauf empfohlen, um Ablöseleistung, Morphologie, Viabilität und Wiederaussaatverhalten unter standortspezifischen Bedingungen zu definieren. Einkaufsmanager können bei der Anforderung wiederholter Chargen CCM-RG-0043 angeben, während technische Teams die Wareneingangsprüfung mit Anforderungen an pH, Osmolalität, Sterilität, Lagerung und Haltbarkeit abgleichen können.
Lagerung und Handhabung
Lagern Sie CCM-RG-0043 gefroren bei -30 bis -5 °C und lichtgeschützt. Die angegebene Haltbarkeit beträgt 24 Monate, wenn das Produkt ungeöffnet bleibt und unter den empfohlenen Bedingungen gelagert wird. Das Produkt wird auf Trockeneis versendet, um den gefrorenen Zustand während des Transports aufrechtzuerhalten; prüfen Sie bei Erhalt den Behälter, verifizieren Sie die Kennzeichnung und überführen Sie es umgehend in eine qualifizierte Tiefkühllagerung. Vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen, da die enzymatische Leistung nach unnötiger thermischer Belastung abnehmen kann. Tauen Sie für die routinemäßige Verwendung nur das benötigte Volumen unter kontrollierten Bedingungen auf, mischen Sie nach dem Auftauen vorsichtig und verwenden Sie aseptische Technik, um das Kontaminationsrisiko zu reduzieren. Nicht über längere Zeiträume erwärmen und unbenutzte Aliquots nur dann in die geeignete Lagerung zurückführen, wenn Ihr internes Verfahren ein erneutes Einfrieren erlaubt. Wie bei anderen enzymatischen Dissoziationsreagenzien sollten Anwender bestätigen, dass Temperatur, Kontaktzeit und Quench-Bedingungen mit dem spezifischen Kultursystem kompatibel sind. Für die standortübergreifende Lieferplanung oder größere Chargenanforderungen übermitteln Sie Details über Angebot anfordern, damit unser Team Verfügbarkeit, Versandzeitpunkt und Dokumentationsbedarf koordinieren kann.
Qualität und Dokumentation
CCM-RG-0043 wird als sterilfiltriertes flüssiges Reagenz tierischen Ursprungs für zellkulturbezogene Anwendungen hergestellt. Die Freigabeinformationen umfassen pH-Bereich, Osmolalitätsbereich, Form, Sterilitätsmethode, Lagerbedingung, Versandbedingung und Haltbarkeit und unterstützen die technische Prüfung durch Qualitäts-, Einkaufs- und Prozessentwicklungsteams. Ein chargenspezifisches Certificate of Analysis ist auf Anfrage verfügbar, und Kunden können unsere Informationen zur Qualität zur Unterstützung der Lieferantenqualifizierung, Wareneingangsprüfung und internen Change-Control-Akten nutzen. Herstellungs- und Dokumentationspraktiken sind auf Qualitätsanforderungen nach ISO-Art für Forschungs- und Bioprocessing-Lieferketten ausgerichtet, mit Fokus auf Rückverfolgbarkeit, Spezifikationskontrolle und konsistente Verpackung.
CellCultureMedia unterstützt internationale B2B-Bestellungen für akademische, biotech- und biopharmazeutische Labore. Diese 500 mL Einheit kostet $201.39, und kostenloser weltweiter Versand ist verfügbar, sofern Bestellbedingungen und Ziellogistik dies zulassen. Trockeneisversand wird zur Temperaturkontrolle eingesetzt, und die Lieferzeit kann vom Lagerstatus, der Exportroute und der Verfügbarkeit von Kühlkettenservices abhängen. Bei wiederkehrendem Bedarf können Anwender Großmengenpreise, planmäßige Belieferung oder reservierte Lagerbestände anfordern, um Beschaffungsvariabilität über Passagierungs-, Zellbanking- und Entwicklungskampagnen hinweg zu reduzieren.
Highlights der Formulierung
Enthält (+)
2.5 g/L trypsin, 0.38 g/L EDTA·4Na
Spezifikationen
| Form | Flüssig |
|---|---|
| Klassifizierung | Tierischen Ursprungs |
| Sterilität | Filtersterilisiert |
| Haltbarkeit | 24 Monate |
| Osmolalität | 270–320 mOsmol/kg |
| pH-Wert | 7.2–8.0 |
| Lagerbedingungen | -30~-5 ℃, vor Licht geschützt |
| Versandbedingungen | Dry ice |
| Anwendungsbereich | Zellkulturbezogene Reagenzien |
| Produktkategorie | Zelldissoziations- und Verdauungsreagenzien |
Über dieses Produkt
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- Zellzählung mit der ZählkammerEine Zählkammer ist ein dicker Glasobjektträger mit präzise eingeätztem Gitter, über dem ein Deckglas eine genau 0.1 mm tiefe Kammer bildet, sodass sich ein bekanntes Volumen einer Zellsuspension unter dem Mikroskop auszählen und in eine Konzentration umrechnen lässt. Bei Säugerzellen zählt man die vier Eckquadrate von je 1 mm2, bildet den Mittelwert, multipliziert mit dem Verdünnungsfaktor und mit 10^4 und erhält so Zellen pro mL — denn jedes Eckquadrat umschließt genau 10^-4 mL. Mischt man die Probe vor dem Befüllen 1:1 mit 0.4% Trypanblau, liefert dieselbe Zählung zugleich den Viabilitätsanteil, da nur tote Zellen mit geschädigter Membran den Farbstoff aufnehmen.
- Trypsin-EDTATrypsin-EDTA ist ein Reagenz zur Zelldissoziation, das die Serinprotease Trypsin — sie spaltet Peptidbindungen C-terminal von Lysin- und Argininresten in Zelloberflächen- und Matrixproteinen — mit dem Komplexbildner EDTA kombiniert, der die von Zelladhäsionsmolekülen benötigten Calcium- und Magnesiumionen bindet. Geliefert wird es in einer Calcium- und Magnesium-freien ausgewogenen Salzlösung, meist mit 0.05% Trypsin (0.5 g/L) für gängige Zelllinien und 0.25% (2.5 g/L) für fest anhaftende Zellen und Primärkulturen. Üblich sind 2-5 Minuten bei 37 °C, gefolgt von der sofortigen Neutralisation mit serumhaltigem Medium oder einem definierten Trypsininhibitor.
- Subkultivierung von Zellen (Passagieren)Die Subkultivierung von Zellen, auch Passagieren genannt, ist die Überführung von Zellen aus einer Kultur, die sich der Konfluenz nähert, in frische Gefäße mit frischem Medium, damit das Wachstum weitergehen kann. Adhärente Zellen werden zuerst abgelöst, meist mit 0.25% oder 0.05% Trypsin-EDTA oder einem nicht enzymatischen Dissoziationsreagenz, und dann in geringerer Dichte neu ausgesät, festgelegt durch ein Teilungsverhältnis wie 1:4; Suspensionszellen werden ohne jeden Dissoziationsschritt einfach in frisches Medium verdünnt. Die meisten kontinuierlichen adhärenten Zelllinien werden bei 70-80% Konfluenz subkultiviert, was in der Regel zwei bis drei Passagen pro Woche bedeutet.
- Trypsin vs. Accutase: Das richtige Zelldissoziationsreagenz wählenTrypsin ist eine Serinprotease aus dem Pankreas, die Peptidbindungen nach Lysin und Arginin spaltet. Sie löst Zellen schnell, aber unselektiv ab, muss mit Serum oder einem Trypsininhibitor gestoppt werden und spaltet neben den Adhäsionskontakten auch Oberflächenproteine. Accutase ist eine proprietäre Mischung proteolytischer und kollagenolytischer Enzyme aus einer wirbellosen Quelle, geliefert in calcium- und magnesiumfreiem DPBS mit 0.5 mM EDTA; sie wirkt langsamer und schonender, benötigt keinen Neutralisationsschritt und erhält mehr Oberflächenepitope. Wählen Sie Trypsin für das routinemäßige Passagieren robuster adhärenter Linien, wenn es auf Tempo ankommt und die Zellen direkt zurück in Kultur gehen; wählen Sie Accutase, wenn die geernteten Zellen selbst das Experiment sind — Durchflusszytometrie auf Oberflächenmarker, pluripotente Stammzellen, primäre Neurone oder jede Einzelzellsuspension, in der Lebensfähigkeit und Phänotyp die Ernte überstehen müssen.
- DispaseDispase, auch als Dispase II oder neutrale Protease angeboten, ist eine zinkabhängige Metalloprotease aus Paenibacillus (früher Bacillus) polymyxa, EC 3.4.24.4, die zur schonenden Zelldissoziation und zum intakten Ablösen von Zellen und Epithelverbänden dient. Sie spaltet Fibronektin und Kollagen Typ IV, baut Kollagen Typ I nur minimal ab und greift Laminin und Kollagen Typ V nicht an – deshalb lässt sich mit ihr eine Epidermis von der Dermis trennen oder ein konfluenter Epithelverband vom Kunststoff abheben, ohne die Zell-Zell-Verbindungen zu zerstören. Da sie als Metalloprotease Zink für die Katalyse und Calcium für die Stabilität braucht, wird sie durch EDTA, EGTA und 1,10-Phenanthrolin gehemmt und muss in einem calciumhaltigen Puffer verdünnt werden, nicht in einem Puffer mit Chelatbildnern.
