Penicillin-Streptomycin 100X Çözeltisi

Bu konuda daha fazla bilgi

• Hücre Kültürü KontaminasyonuHücre kültürü kontaminasyonu altı gruba ayrılır: bakteriler, mayalar, filamentli mantarlar ve küfler, mikoplazma, virüsler ve başka bir hücre hattıyla çapraz kontaminasyon. Bakteri, maya ve mantar kendini bir ila beş gün içinde bulanıklık, pH kayması ya da mikroskopta görülen partiküllerle belli eder; yapılacak şey kültürü atmak ve onların girmesine izin veren aseptik teknik hatasını bulmaktır. Mikoplazma, viral kontaminasyon ve yanlış tanımlanmış hücre hattı ise hiçbir görünür değişiklik yaratmaz; yalnızca test ile saptanır — mikoplazma için PCR veya DNA boyama, kimlik için STR profillemesi. Doğrulanmış her biyolojik kontaminasyonda doğru müdahale aynıdır: etkilenen kültürü atmak, inkübatörü dekontamine etmek ve temiz bir dondurulmuş stoktan yeniden başlamak.
• Memeli Hücre Seçimi için PuromisinPuromisin, Streptomyces alboniger kaynaklı bir aminonükleozit antibiyotiktir; tRNA'nın aminoaçil ucunu taklit ederek ribozomun A bölgesine girer ve kısalmış bir peptit zincirinin erken salınmasına yol açar, böylece onu etkisizleştiremeyen hücreleri öldürür. Memeli hücre kültüründe 0,5-10 µg/mL aralığında, en yaygın olarak da 1-2 µg/mL derişiminde seçici antibiyotik olarak kullanılır ve dirençli olmayan hücreleri yaygın seçici antibiyotiklerin hepsinden hızlı öldürür — tipik olarak 2-5 gün içinde. Direnç, puromisin N-asetiltransferazı kodlayan pac geniyle sağlanır; bu enzim ilacı asetilleyerek etkisiz hâle getirir. Etkin derişim hücre hattına, hücre yoğunluğuna ve serum içeriğine güçlü biçimde bağlı olduğu için, her yeni hücre hattı ve her yeni puromisin partisi için bir öldürme eğrisi çalışılmalıdır.
• Hücre Kültüründe Penisilin-Streptomisin ve Antibiyotik-AntimikotikYaygın olarak Pen-Strep diye kısaltılan penisilin-streptomisin, 10.000 birim/mL penisilin G ile 10.000 µg/mL streptomisin içeren 100X'lik steril bir çözelti olarak sunulur; besiyerine 1:100 seyreltilerek 100 U/mL penisilin ve 100 µg/mL streptomisinlik bir çalışma derişimi verir. Penisilin bakteriyel hücre duvarı sentezini engeller ve başlıca Gram-pozitif organizmaları kapsar; streptomisin bakteriyel 30S ribozomal alt birime bağlanır ve başlıca Gram-negatifleri kapsar, dolayısıyla ikili birlikte geniş bir antibakteriyel örtü sağlar. Antibiyotik-antimikotik (anti-anti) aynı bileşimin üzerine 100X'te 25 µg/mL amfoterisin B ekler; kullanımda 0,25 µg/mL vererek antifungal koruma sağlar. Hiçbiri mikoplazmayı denetleyemez ve ATCC dahil başlıca hücre bankaları, düşük düzeyli kontaminasyonu önlemek yerine maskelediği için antibiyotiklerin rutin kullanımını önermez.
• Hücre Kültüründe Mikoplazma TestiMikoplazma testi, laboratuvar hücre kültürlerini bulanıklık, pH değişimi ya da başka herhangi bir görünür iz bırakmadan kontamine eden Mollicutes türlerini saptar; bir kültürün mL başına 10⁷–10⁸ organizma taşırken bile sapasağlam görünmesinin nedeni budur. Pratikte kullanılan yöntemler şunlardır: PCR ya da qPCR (kabaca 1–10 CFU/mL, sonuç aynı gün), enzimatik lüminesans testleri (yaklaşık 20 dakika, orta düzey duyarlılık), bir indikatör hücre hattı üzerinde okunan floresan DNA boyama (zenginleştirme basamağının kullanılıp kullanılmamasına göre yaklaşık 10²–10⁶ CFU/mL) ve hâlâ referans yöntem sayılan ama 28 güne kadar süren doğrudan sıvı besiyeri ve agar kültürü. Kültürleri geldiklerinde, karantinadan sonra ve ardından en az ayda bir test edin; doğrulanmış bir pozitif normalde tedavi edilmez — atılır ve temiz bir dondurulmuş stoktan yeniden başlatılır.