Avustralya Menşeli Fetal Sığır Serumu

Bu konu hakkında daha fazlası

• Hücre Kültüründe Endotoksin TestiEndotoksin testi, laboratuvar suyunda, besiyerinde, serumlarda ve reaktiflerde bulunan bakteriyel lipopolisakkariti (LPS) ölçer; sonuç mililitre başına endotoksin ünitesi (EU/mL) olarak bildirilir ve 1 EU, referans standart E. coli endotoksininin yaklaşık 0,1-0,2 ng'ına karşılık gelir. Farmakope yöntemleri, USP <85> kapsamındaki jel-pıhtı, türbidimetrik ve kromojenik biçimleriyle LAL (limulus amebosit lizatı) testi ile USP <86> kapsamındaki hayvansal kaynak içermeyen rekombinant Faktör C (rFC) testidir; kinetik formatlar yaklaşık 0,001-0,005 EU/mL düzeyine kadar nicel ölçüm yapar. Hücre kültüründe pratik limitler su için 0,25 EU/mL, hücre kültürü kalitesindeki reaktiflerin çoğu için ≤1 EU/mL ve fetal sığır serumu için genel sektör standardı olarak ≤10 EU/mL'dir; düşük endotoksinli kaliteler ≤1 EU/mL, ultra düşük kaliteler ise 0,1 EU/mL'nin altındadır. Endotoksin otoklavlamadan sağ çıkar ve 0,2 µm filtrelerden geçer; bu nedenle sonradan uzaklaştırılmak yerine kaynağında dışarıda bırakılmalıdır.
• Hücre Kültüründe Sığır SerumuSığır serumu, pıhtılaşmış sığır kanının sıvı kısmıdır; bazal besiyerlerinde bulunmayan büyüme faktörlerini, hormonları, taşıyıcı ve tutunma proteinlerini, lipitleri ve eser elementleri sağlamak üzere kültür besiyerine %5-10 oranında eklenir. Fetal sığır serumu (FBS) ile fetal buzağı serumu (FCS) aynı ürünün iki adıdır ve gebe ineklerin kesimi sırasında fetüsten toplanır; yenidoğan buzağı serumu yaklaşık 20 günlükten küçük buzağılardan, donör sığır serumu ise kabaca 12-36 aylık denetimli donör sürülerinden gelir ve her ikisi de FBS'ye göre daha çok immünoglobulin, daha az büyüme faktörü içerir. Serum tanımsız bir biyolojik materyal olduğu, partiler arası değişkenliği yüksek olduğu, hayvan refahı soruları çözülmediği ve tedarik zinciri oynak olduğu için, hücre hattının kaldırabildiği her yerde tanımlı serumsuz ve hayvansal kaynak içermeyen besiyerleri giderek daha çok yeğleniyor.
• Fetal Sığır Serumunun (FBS) Isıl İnaktivasyonuFetal sığır serumunun ısıl inaktivasyonu, serum besiyerine katılmadan önce kompleman kaskadının ısıya duyarlı proteinlerini yok eden, 56 °C'de 30 dakikalık denetimli bir inkübasyondur. Serum çözülür, 37 °C'ye getirilir, 56 °C'lik bir su banyosuna aktarılır, serumun kendisi bu sıcaklığa ulaştığı andan itibaren tam 30 dakika tutulur — bu süre boyunca 5-10 dakikada bir hafifçe çalkalanır — ardından hemen soğutulur ve alikotlara ayrılır. Yerleşik hücre hatlarının rutin kültüründe genellikle gereksizdir; çünkü fetal serumdaki kompleman aktivitesi düşüktür ve ısıtma aynı zamanda ısıya duyarlı büyüme faktörlerini de bozar. Buna karşılık immünolojik testlerde ve komplemana duyarlı hücrelerde standart uygulama olmayı sürdürür.
• DF-1 Tavuk Embriyo Fibroblast HücreleriDF-1 (UMNSAH/DF-1, ATCC CRL-12203), endojen aviyan lökoz virüsü lokuslarından yoksun bir tavuk hattı olan East Lansing Line 0 embriyolarından türetilmiş, kendiliğinden ölümsüzleşmiş bir tavuk embriyo fibroblastı hattıdır. Hiçbir endojen retrovirüs taşımadığı ve viral ya da kimyasal dönüşüm olmaksızın ölümsüzleştiği için, aviyan virolojide, aşı geliştirmede ve rekombinant virüs üretiminde primer tavuk embriyo fibroblastlarının standart sürekli alternatifidir. DF-1 hücreleri yüksek glukozlu DMEM'de %10 fetal sığır serumu ile 37 °C ve %5 CO2 koşullarında kültüre alınır, primer CEF'ten daha hızlı büyür, etkin biçimde transfekte edilir ve aviyan influenza, enfeksiyöz bursal hastalık virüsü, aviyan lökoz ve sarkom virüsleri ile diğer birçok aviyan patojenin replikasyonunu CEF'e eşit ya da ondan yüksek titrelerde destekler.
• Hücre Kültüründe Mikoplazma TestiMikoplazma testi, laboratuvar hücre kültürlerini bulanıklık, pH değişimi ya da başka herhangi bir görünür iz bırakmadan kontamine eden Mollicutes türlerini saptar; bir kültürün mL başına 10⁷–10⁸ organizma taşırken bile sapasağlam görünmesinin nedeni budur. Pratikte kullanılan yöntemler şunlardır: PCR ya da qPCR (kabaca 1–10 CFU/mL, sonuç aynı gün), enzimatik lüminesans testleri (yaklaşık 20 dakika, orta düzey duyarlılık), bir indikatör hücre hattı üzerinde okunan floresan DNA boyama (zenginleştirme basamağının kullanılıp kullanılmamasına göre yaklaşık 10²–10⁶ CFU/mL) ve hâlâ referans yöntem sayılan ama 28 güne kadar süren doğrudan sıvı besiyeri ve agar kültürü. Kültürleri geldiklerinde, karantinadan sonra ve ardından en az ayda bir test edin; doğrulanmış bir pozitif normalde tedavi edilmez — atılır ve temiz bir dondurulmuş stoktan yeniden başlatılır.