Fetales Rinderserum australischen Ursprungs

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• Endotoxinbestimmung in der ZellkulturDie Endotoxinbestimmung misst bakterielles Lipopolysaccharid (LPS) in Laborwasser, Medien, Seren und Reagenzien und gibt das Ergebnis in Endotoxineinheiten pro Milliliter (EU/mL) an, wobei 1 EU etwa 0.1–0.2 ng Referenzstandard-Endotoxin aus E. coli entspricht. Die Arzneibuchverfahren sind der LAL-Test (Limulus-Amöbozyten-Lysat) in den Varianten Gelclot, turbidimetrisch und chromogen nach USP <85> sowie der tierfreie Test mit rekombinantem Faktor C (rFC) nach USP <86>; kinetische Formate quantifizieren bis hinunter zu etwa 0.001–0.005 EU/mL. Praxisübliche Grenzwerte in der Zellkultur sind 0.25 EU/mL für Wasser, ≤1 EU/mL für die meisten Reagenzien in Zellkulturqualität und ≤10 EU/mL als allgemeiner Branchenstandard für fötales Rinderserum, mit endotoxinarmen Qualitäten bei ≤1 EU/mL und besonders endotoxinarmen Qualitäten unter 0.1 EU/mL. Endotoxin übersteht das Autoklavieren und passiert 0.2-µm-Filter, es muss daher an der Quelle ausgeschlossen und kann nicht nachträglich entfernt werden.
• Rinderserum in der ZellkulturRinderserum ist der flüssige Anteil geronnenen Rinderbluts und wird dem Nährmedium mit 5-10 % zugesetzt, um Wachstumsfaktoren, Hormone, Transport- und Anheftungsproteine, Lipide und Spurenelemente zu liefern, die Basalmedien nicht enthalten. Fötales Rinderserum (FBS) und fötales Kälberserum (FCS) sind zwei Namen für dasselbe Produkt, das beim Schlachten trächtiger Kühe vom Fötus gewonnen wird; Neugeborenen-Kälberserum stammt von Kälbern unter etwa 20 Tagen und Spenderrinderserum aus kontrollierten Spenderherden im Alter von rund 12-36 Monaten -- beide enthalten mehr Immunglobulin und weniger Wachstumsfaktoren als FBS. Weil Serum ein undefiniertes biologisches Material mit erheblichen Chargenschwankungen, ungeklärten Tierschutzfragen und einer schwankenden Lieferkette ist, werden definierte serumfreie und von tierischen Bestandteilen freie Medien überall dort zunehmend bevorzugt, wo die Zelllinie sie verträgt.
• Hitzeinaktivierung von fötalem Rinderserum (FBS)Die Hitzeinaktivierung von fötalem Rinderserum ist eine kontrollierte Inkubation von 30 Minuten bei 56 °C, die die hitzelabilen Proteine der Komplementkaskade zerstört, bevor das Serum dem Nährmedium zugesetzt wird. Das Serum wird aufgetaut, auf 37 °C gebracht, in ein Wasserbad mit 56 °C überführt, ab dem Moment, in dem das Serum selbst die Temperatur erreicht, genau 30 Minuten gehalten -- unter vorsichtigem Schwenken alle 5-10 Minuten --, danach sofort gekühlt und portioniert. Für die Routinekultur etablierter Zelllinien ist der Schritt meist unnötig, weil die Komplementaktivität in fötalem Serum niedrig ist und das Erhitzen zugleich labile Wachstumsfaktoren abbaut; für immunologische Untersuchungen und komplementempfindliche Zellen bleibt er gängige Praxis.
• DF-1 Hühnerembryo-FibroblastenzellenDF-1 (UMNSAH/DF-1, ATCC CRL-12203) ist eine spontan immortalisierte Hühnerembryo-Fibroblastenlinie, die aus Embryonen der East Lansing Line 0 stammt -- einer Hühnerlinie ohne endogene Loci des aviären Leukosevirus. Da sie kein endogenes Retrovirus trägt und ohne virale oder chemische Transformation immortalisiert wurde, ist sie der etablierte kontinuierliche Ersatz für primäre Hühnerembryo-Fibroblasten in der aviären Virologie, der Impfstoffentwicklung und der Herstellung rekombinanter Viren. DF-1-Zellen werden in DMEM mit hohem Glucosegehalt und 10% fetalem Kälberserum bei 37 °C und 5% CO2 kultiviert, wachsen schneller als primäre CEF, lassen sich effizient transfizieren und unterstützen die Replikation von aviärer Influenza, dem Virus der infektiösen Bursitis, aviären Leukose- und Sarkomviren sowie vielen weiteren aviären Erregern mit Titern, die denen auf CEF entsprechen oder darüber liegen.
• Einfriermedium für Zellen und Protokolle zur KryokonservierungEin Einfriermedium für Zellen ist eine Lösung mit Kryoprotektivum, die Zellen das Einfrieren und die Langzeitlagerung überstehen lässt; am häufigsten besteht es aus einem Basalmedium oder Serum mit 5-10% Dimethylsulfoxid (DMSO), wobei 10% der Standardausgangspunkt ist. DMSO dringt in die Zelle ein und verändert, wie Wasser gefriert; so werden die intrazellulären Eiskristalle verhindert, die sonst beim Abkühlen die Membranen zerreißen. Zellen werden mit einer definierten Abkühlrate von etwa 1 C pro Minute auf -80 C gebracht und anschließend in die Gasphase über flüssigem Stickstoff überführt, denn die Langzeitlagerung erfordert Temperaturen unterhalb von etwa -135 C, damit Eis nicht rekristallisiert. Das Auftauen verläuft umgekehrt - so schnell wie möglich im 37-C-Wasserbad, gefolgt von zügigem Verdünnen, um das DMSO zu entfernen, das oberhalb des Gefrierpunkts für Zellen toxisch ist.