Réactifs de culture cellulaire
Un lot libéré de DPBS à pH 7.21 et 296 mOsmol/kg vous en dit plus qu’une description générale de tampon. Ce catalogue couvre 98 réactifs de culture cellulaire utilisés aux étapes de tampon/lavage, dissociation, expansion et congélation. Les acheteurs commencent généralement par PBS ou HBSS, puis ajoutent Trypsin-EDTA, Penicillin-Streptomycin, L-Glutamine, ITS ou B-27 supplement, ainsi qu’un milieu de congélation assorti. Chaque lot est contrôlé par rapport aux spécifications de libération avant expédition.
Réactifs de culture cellulaire : contenu de ce catalogue et critères de sélection
Périmètre du catalogue : 98 réactifs couvrant PBS / DPBS, HBSS, HEPES buffer, Trypsin-EDTA, Penicillin-Streptomycin, L-Glutamine, ITS supplement, B-27 supplement, les milieux de congélation cellulaire et les enzymes de dissociation, notamment Collagenase, Dispase et Accutase.
Le flux de travail le plus courant est tampon/lavage → dissociation → expansion → congélation. Pour les lignées adhérentes telles que HeLa (ATCC CCL-2), Vero (ATCC CCL-81), MDCK (ATCC CCL-34) et NIH 3T3 (ATCC CRL-1658), le choix du réactif affecte le temps de détachement, la récupération membranaire et la viabilité après passage. Pour HEK293T (ATCC CRL-3216), la dérive de l’osmolalité pendant le lavage et la préparation de la transfection est souvent plus importante que ce que les utilisateurs anticipent.
Commencez par le type cellulaire, la condition sérique et l’essai en aval.
Pour la culture mammalienne de routine, sélectionnez DPBS sans calcium ni magnésium pour le lavage avant Trypsin-EDTA. Pour les monocouches épithéliales ou plus sensibles au cisaillement, utilisez la force enzymatique et le temps de contact comme variables de contrôle. Pour une expansion à teneur réduite en sérum, associez la planification de L-Glutamine ou d’une source stable de glutamine avec une supplémentation de type ITS ou B-27, car la dégradation de la glutamine et la formation d’ammoniac peuvent modifier les performances de croissance sur plusieurs jours [1] Ozturk SS, Palsson BO. Biotechnol Prog 1990;6(2):121-128. doi:10.1021/bp00002a005.
Arbre décisionnel
1. Lavez-vous les cellules avant la dissociation ?
- Utilisez DPBS sans calcium ni magnésium pour les flux de travail avec Trypsin-EDTA.
- Utilisez HBSS lorsqu’une manipulation courte hors milieu complet nécessite des sels équilibrés et un apport en glucose.
- Utilisez HEPES buffer lorsque les plaques restent plus de 10 minutes hors conditions à 5% CO₂.
2. Les cellules sont-elles adhérentes ou en suspension ?
- Adhérentes : choisissez Trypsin-EDTA, Accutase, Dispase ou Collagenase selon la résistance de la matrice extracellulaire.
- Suspension : donnez la priorité aux suppléments d’expansion, aux antibiotiques lorsqu’ils sont justifiés, et aux milieux de congélation.
- Cultures primaires ou riches en matrice : testez Collagenase à 0.5-2.0 mg/mL et consignez le rendement viable par cm².
3. L’essai final est-il sensible aux antibiotiques ou à l’enzyme résiduelle ?
- Pour la transfection avec HEK293T (ATCC CRL-3216), évitez l’entraînement systématique d’antibiotiques pendant l’optimisation.
- Pour les essais métaboliques dans HepG2 (ATCC HB-8065), suivez l’âge de la glutamine et le bruit de fond du glucose.
- Pour l’imagerie dans U-2 OS (ATCC HTB-96), rincez soigneusement le phenol red et l’enzyme résiduelle si le bruit de fond de fluorescence est important.
Réponse courte : choisissez le réactif le plus doux qui donne le rendement cellulaire requis dans une fenêtre de temps reproductible.
Comparaison des spécifications entre produits
| Famille de réactifs | Contrôles de libération typiques | Exemple de valeur du lot actuel | Note de sélection courante |
|---|---|---|---|
| PBS / DPBS | pH 7.0-7.4, osmolalité 260-320 mOsmol/kg, stérilité | pH 7.21, 296 mOsmol/kg, USP <71> conforme | Choisir sans calcium ni magnésium avant la trypsinisation. |
| HBSS | pH 7.1-7.5, osmolalité 270-330 mOsmol/kg, endotoxine | pH 7.32, 305 mOsmol/kg, endotoxine ≤0.25 EU/mL par LAL | Utile pour les lavages courts lorsque des sels contenant du glucose sont préférés. |
| HEPES buffer | Concentration en HEPES 1.0 M ou formats 25 mM, pH 7.20-7.50 | pH 7.38 à 20-25°C, charge microbienne non détectée | Améliore le contrôle du pH pendant les manipulations sur paillasse hors incubateurs CO₂. |
| Trypsin-EDTA | Activité de la trypsine, concentration en EDTA, stérilité, mycoplasmes par qPCR | 0.25% trypsine, 0.53 mM EDTA, mycoplasmes non détectés | Utiliser une exposition chronométrée, généralement 2-6 minutes pour de nombreuses monocouches immortalisées. |
| Penicillin-Streptomycin | Puissance, limpidité, stérilité | 10,000 U/mL penicillin, 10,000 µg/mL streptomycin, USP <71> conforme | Bon réactif de maîtrise du risque, mais ne remplace pas une technique aseptique. |
| L-Glutamine | Concentration, pH, osmolalité, aspect | 200 mM, pH 6.1, solution limpide | Planifier la taille des aliquotes, car la glutamine se décompose pendant le stockage au chaud [1] Ozturk SS, Palsson BO. Biotechnol Prog 1990;6(2):121-128. doi:10.1021/bp00002a005. |
| Cell freezing media | Concentration en DMSO, stérilité, test de récupération | Format 10% DMSO, HEK293T (ATCC CRL-3216) viabilité après décongélation de 91.8% à 24 h | Adapter le taux de refroidissement, la densité par flacon et la préférence sans sérum ou avec sérum. |
Pour les réactifs à forte utilisation, demandez le certificat d’analyse actuel avec les champs pH, osmolalité, endotoxines, stérilité et mycoplasmes avant l’émission du bon de commande.
Pièges courants
Utiliser le mauvais format de sels avant la dissociation. Le calcium et le magnésium peuvent ralentir la libération par Trypsin-EDTA pour certaines monocouches. Si le détachement de HeLa (ATCC CCL-2) passe de 3 minutes à 8 minutes après un changement de tampon, vérifiez si le tampon de lavage contient des cations divalents.
Laisser l’enzyme trop longtemps sur les cellules. Une surexposition peut réduire la récupération des protéines membranaires et diminuer l’efficacité d’attachement après passage. Pour Vero (ATCC CCL-81), une fenêtre de procédé pratique est souvent de 3-5 minutes à 37°C avec confirmation visuelle, puis neutralisation rapide.
Considérer les antibiotiques comme une solution permanente. Penicillin-Streptomycin peut supprimer la croissance bactérienne visible tout en laissant des problèmes de technique non résolus. Pour les banques cellulaires et l’expansion critique pour les essais, utilisez des passages sans antibiotiques avant la lecture finale et conservez la qPCR mycoplasmes dans le plan de libération.
Ignorer la variabilité du sérum et des suppléments. Les choix de sérum et de suppléments influencent la prolifération, l’état de différenciation et les réponses au stress. Les discussions sur le remplacement du sérum se concentrent souvent sur l’éthique et l’approvisionnement, mais le point analytique est plus simple : définir le critère mesurable avant de changer de suppléments [2] van der Valk J et al. ALTEX 2018;35(1):99-118. doi:10.14573/altex.1705101.
Fiches produit
PBS / DPBS : tampons de lavage de routine en formats sans calcium ni magnésium ou en formats de sels complets. Plage de libération typique : pH 7.0-7.4 et 260-320 mOsmol/kg.
HBSS : solution saline équilibrée pour les étapes de manipulation courtes, le transport entre salles et les conditions de lavage où des sels contenant du glucose sont utiles.
HEPES buffer : stabilisation du pH pour les procédures sur paillasse, la préparation en microscopie et la manipulation de plaques hors CO₂ contrôlé.
Trypsin-EDTA : dissociation de cellules adhérentes aux formats 0.05% ou 0.25% trypsine. Sélectionner selon la force d’adhésion cellulaire et l’impact acceptable sur les marqueurs de surface.
Penicillin-Streptomycin : stock antibiotique courant 100×, généralement 10,000 U/mL penicillin et 10,000 µg/mL streptomycin.
L-Glutamine : stock 200 mM pour la supplémentation des milieux. Utiliser de petits aliquots et éviter les réchauffements répétés.
ITS supplement : support en insuline, transferrine et sélénium pour les études de croissance à sérum réduit.
B-27 supplement : support pour cultures neuronales et spécialisées lorsqu’une supplémentation définie est requise.
Cell freezing media : formats de cryoconservation avec sérum et sans sérum, couramment avec 10% DMSO et refroidissement à vitesse contrôlée.
Collagenase / Dispase / Accutase : choix enzymatiques pour les tissus primaires, les feuillets épithéliaux, la manipulation d’organoïdes et les besoins de passage plus doux.
Résumé de commande : choisissez la famille de réactifs, la taille de conditionnement, l’exigence de filtration stérile et les champs de CoA nécessaires au CQ à réception. Pour les laboratoires récurrents, nous pouvons établir un devis pour des cartons mixtes couvrant PBS, Trypsin-EDTA, L-Glutamine et les milieux de congélation.
LIVRAISON GRATUITE DANS LE MONDE ENTIERGuides associés
- Comment choisir PBS plutôt que DPBS : composition en sels, calcium et magnésium, et impact sur la dissociation.
- Guide de temps d’exposition à Trypsin-EDTA : fenêtres pratiques de détachement pour HEK293T (ATCC CRL-3216), CHO-K1 (ATCC CCL-61), Vero (ATCC CCL-81) et MDCK (ATCC CCL-34).
- Manipulation de la glutamine dans les salles chaudes : pourquoi les stocks 200 mM doivent être aliquotés et protégés des cycles de température répétés.
- Comparaison des milieux de congélation : pourcentage de DMSO, viabilité après décongélation, récupération à 24 h et morphologie au premier passage.
Pour les équipes de développement en amont, le contrôle des réactifs devient une composante du contrôle du procédé. Les performances de la culture mammalienne sont sensibles à la stabilité des nutriments, au contrôle de la contamination et à la reproductibilité des manipulations, en particulier lors du passage de flacons à des systèmes de bioréacteurs contrôlés [3] Butler M, Meneses-Acosta A. Appl Microbiol Biotechnol 2012;96(4):885-894. doi:10.1007/s00253-012-4451-z.
