細胞培養試薬
pH 7.21および296 mOsmol/kgのDPBSリリースロットは、広範な緩衝液の説明よりも多くの情報を示します。このカタログでは、緩衝液/洗浄、解離、増殖、凍結の各ステップで使用される98種類の細胞培養試薬を取り扱っています。購入者は通常、PBSまたはHBSSから開始し、その後Trypsin-EDTA、Penicillin-Streptomycin、L-Glutamine、ITSまたはB-27 supplement、および適合する凍結培地を追加します。各ロットは出荷前にリリース仕様に照らして確認されます。
細胞培養試薬：このカタログの内容と選び方
カタログ範囲： PBS / DPBS、HBSS、HEPESバッファー、トリプシン-EDTA、ペニシリン-ストレプトマイシン、L-グルタミン、ITSサプリメント、B-27サプリメント、細胞凍結培地、およびコラゲナーゼ、ディスパーゼ、Accutaseを含む解離酵素にわたる98種類の試薬。
最も一般的なワークフローは、バッファー/洗浄 → 解離 → 増殖 → 凍結です。HeLa (ATCC CCL-2)、Vero (ATCC CCL-81)、MDCK (ATCC CCL-34)、およびNIH 3T3 (ATCC CRL-1658)などの接着性株では、試薬の選択が剥離時間、膜回復、および継代後の生存率に影響します。HEK293T (ATCC CRL-3216)では、洗浄およびトランスフェクション準備中の浸透圧ドリフトが、利用者の想定以上に重要なことがよくあります。
細胞種、血清条件、および下流アッセイから始めてください。
日常的な哺乳類細胞培養では、トリプシン-EDTA前の洗浄に、カルシウムおよびマグネシウム不含のDPBSを選択します。上皮系またはよりせん断に敏感な単層の場合は、酵素強度と接触時間を制御変数として使用してください。血清低減条件での増殖では、L-グルタミンまたは安定グルタミン源の計画をITSまたはB-27型サプリメントと組み合わせてください。グルタミン分解とアンモニア形成は、数日間で増殖性能を変化させる可能性があるためです [1] オズターク SS、パルソン BO。バイオテクノロジー・プログレス 1990;6(2):121-128. doi:10.1021/bp00002a005.
意思決定ツリー
1. 解離前に細胞を洗浄しますか？
- トリプシン-EDTAワークフローには、カルシウムおよびマグネシウム不含のDPBSを使用してください。
- 完全培地外での短時間操作に、平衡塩類とグルコースサポートが必要な場合はHBSSを使用してください。
- プレートが5% CO₂条件外に10分を超えて置かれる場合は、HEPESバッファーを使用してください。
2. 細胞は接着性ですか、それとも浮遊性ですか？
- 接着性：細胞外マトリックスの強さに基づいて、トリプシン-EDTA、Accutase、ディスパーゼ、またはコラゲナーゼを選択します。
- 浮遊性：増殖サプリメント、妥当性がある場合の抗生物質、および凍結培地を優先します。
- 初代またはマトリックスに富む培養：0.5-2.0 mg/mLでコラゲナーゼを試験し、cm²あたりの生存細胞収量を記録します。
3. エンドポイントアッセイは抗生物質または残留酵素に敏感ですか？
- HEK293T (ATCC CRL-3216)でのトランスフェクションでは、最適化中の日常的な抗生物質の持ち越しを避けてください。
- HepG2 (ATCC HB-8065)での代謝アッセイでは、グルタミンの経時状態とグルコースバックグラウンドを追跡してください。
- U-2 OS (ATCC HTB-96)でのイメージングでは、蛍光バックグラウンドが重要な場合、残留フェノールレッドと酵素を十分にすすいでください。
簡潔な答え：再現性のある時間枠内で必要な細胞収量を得られる、最も穏やかな試薬を選択してください。
製品間の仕様比較
| 試薬ファミリー | 標準的な出荷判定確認 | 現在ロット値の例 | 一般的な選択メモ |
|---|---|---|---|
| PBS / DPBS | pH 7.0-7.4、浸透圧260-320 mOsmol/kg、無菌性 | pH 7.21、296 mOsmol/kg、米国薬局方 <71> 合格 | トリプシン処理前はカルシウムおよびマグネシウム不含を選択します。 |
| HBSS | pH 7.1-7.5、浸透圧270-330 mOsmol/kg、エンドトキシン | pH 7.32、305 mOsmol/kg、LALによるエンドトキシン≤0.25 EU/mL | グルコース含有塩類が望ましい短時間洗浄に有用です。 |
| HEPESバッファー | HEPES濃度1.0 Mまたは25 mM形式、pH 7.20-7.50 | 20-25°CでpH 7.38、バイオバーデン検出されず | CO₂インキュベーター外でのベンチ操作中のpH管理を改善します。 |
| トリプシン-EDTA | トリプシン活性、EDTA濃度、無菌性、マイコプラズマqPCR | 0.25%トリプシン、0.53 mM EDTA、マイコプラズマ検出されず | 時間を決めた曝露を使用し、多くの不死化単層では通常2-6分です。 |
| ペニシリン-ストレプトマイシン | 力価、清澄性、無菌性 | 10,000 U/mLペニシリン、10,000 µg/mLストレプトマイシン、米国薬局方 <71> 合格 | リスク管理試薬としては有用ですが、無菌操作技術の代替ではありません。 |
| L-グルタミン | 濃度、pH、浸透圧、外観 | 200 mM、pH 6.1、澄明溶液 | グルタミンは温かい保管中に分解するため、分注サイズを計画してください [1] オズターク SS、パルソン BO。バイオテクノロジー・プログレス 1990;6(2):121-128. doi:10.1021/bp00002a005. |
| 細胞凍結培地 | DMSO濃度、無菌性、回復試験 | 10% DMSO形式、HEK293T (ATCC CRL-3216)の解凍後24 h時点の生存率91.8% | 冷却速度、バイアル密度、および無血清または血清含有の希望に合わせます。 |
使用頻度の高い試薬については、発注書発行前に、pH、浸透圧、エンドトキシン、無菌性、およびマイコプラズマ欄を含む最新の分析証明書を請求してください。
よくある落とし穴
解離前に誤った塩類形式を使用すること。 カルシウムとマグネシウムは、一部の単層でトリプシン-EDTAによる遊離を遅らせる可能性があります。HeLa (ATCC CCL-2)の剥離がバッファー変更後に3分から8分へ延びた場合は、洗浄バッファーに二価陽イオンが含まれているか確認してください。
酵素を細胞上に長く残しすぎること。 過剰曝露は膜タンパク質の回復を低下させ、継代後の接着効率を下げる可能性があります。Vero (ATCC CCL-81)では、実用的なプロセスウィンドウは多くの場合、37°Cで3-5分、目視確認後に速やかに中和することです。
抗生物質を恒久的な解決策として扱うこと。 ペニシリン-ストレプトマイシンは、技術上の問題を未解決のまま、目に見える細菌増殖を抑制する場合があります。セルバンクおよびアッセイ上重要な増殖では、最終読み取り前に抗生物質不含の継代を使用し、出荷判定計画にマイコプラズマqPCRを含めてください。
血清およびサプリメントの変動性を無視すること。 血清およびサプリメントの選択は、増殖、分化状態、およびストレス応答に影響します。血清代替の議論は倫理と供給に焦点を当てることが多いですが、分析上の要点はより単純です。サプリメントを変更する前に、測定可能なエンドポイントを定義してください [2] ファン・デル・ファルク J ほか。アルテックス 2018;35(1):99-118. doi:10.14573/altex.1705101.
製品カード
PBS / DPBS： カルシウムおよびマグネシウム不含、または完全塩類形式の日常洗浄バッファー。標準的な出荷判定範囲：pH 7.0-7.4および260-320 mOsmol/kg。
HBSS： 短時間操作、室間搬送、およびグルコース含有塩類が有用な洗浄条件向けの平衡塩類溶液。
HEPESバッファー： ベンチ手順、顕微鏡セットアップ、および管理されたCO₂外でのプレート操作のためのpH安定化。
トリプシン-EDTA： 0.05%または0.25%トリプシン形式での接着細胞解離。細胞接着強度と許容される表面マーカーへの影響により選択します。
ペニシリン-ストレプトマイシン： 一般的な100×抗生物質ストックで、通常は10,000 U/mLペニシリンおよび10,000 µg/mLストレプトマイシンです。
L-グルタミン： 培地補充用の200 mMストック。少量に分注し、繰り返しの加温を避けてください。
ITSサプリメント： 血清低減増殖研究向けのインスリン、トランスフェリン、およびセレンによるサポート。
B-27サプリメント： 規定サプリメントが必要な神経系および特殊培養のサポート。
細胞凍結培地： 血清含有および無血清の凍結保存形式で、一般的に10% DMSOと制御速度冷却を用います。
コラゲナーゼ / ディスパーゼ / Accutase： 初代組織、上皮シート、オルガノイド操作、およびより穏やかな継代が必要な場合の酵素選択肢。
注文概要： 試薬ファミリー、包装サイズ、無菌ろ過要件、および受入品質管理に必要な分析証明書項目を選択してください。継続利用する研究室向けには、PBS、トリプシン-EDTA、L-グルタミン、および凍結培地を組み合わせた混載カートンを見積できます。
世界中への送料無料関連ガイド
- PBSとDPBSの選び方： 塩類組成、カルシウムおよびマグネシウム、ならびに解離への影響。
- トリプシン-EDTA時間ガイド： HEK293T (ATCC CRL-3216)、CHO-K1 (ATCC CCL-61)、Vero (ATCC CCL-81)、およびMDCK (ATCC CCL-34)における実用的な剥離時間枠。
- 温かい室内でのグルタミン取り扱い： 200 mMストックを分注し、繰り返しの温度サイクルから保護すべき理由。
- 凍結培地の比較： DMSO割合、解凍後生存率、24 h時点での回復、および初回継代の形態。
上流工程開発チームにとって、試薬管理はプロセス管理の一部になります。哺乳類細胞培養の性能は、栄養安定性、汚染管理、および取り扱い再現性に敏感であり、特にフラスコから制御されたバイオリアクターシステムへ移行する際に重要です [3] バトラー M、メネセス-アコスタ A。応用微生物学・バイオテクノロジー 2012;96(4):885-894. doi:10.1007/s00253-012-4451-z.
